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细胞简介：

大鼠精原干细胞分离自睾丸组织；精原干细胞是位于睾丸生精小管的生精上皮内的一群生精干细胞，是成体内的定向干细胞。精原干细胞的一些独特优势使其成为动物转基因的理想宿主细胞。精原干细胞的生理生化特性及其分裂增殖、分化等多项生命活动的调节机制的深入研究，精子发生机理的进一步阐明以及精原干细胞转染，异体、异种移植技术的实际应用，都迫切需要找到一种可行的方法将其分离纯化，以期得到较高产量和纯度的有活力的精原细胞用于体外培养。在哺乳动睾丸内，精子发生时一个受高度调控和持续的过程，精原干细胞（SSCs）一方面进行自我更新维持干细胞数量，另一方面又不断执行分化成各级生精细胞直至最后生成精子。精原干细胞定居在曲精细管上皮的基膜处，是哺乳动物精子发生的最原始细胞，也是动物体内一起能将遗传信息传递的干细胞。精原干细胞体外培养体系的建立，在生物学、医学、畜牧业生产及制备转基因动物等领域具有广阔的应用前景。精原干细胞（SSCs）是生精上皮近基底膜的一群细胞，具有自我更新能力和多向分化潜能，是哺乳动物体内**能将遗传信息传递给下一代的成体干细胞。

方法简介：

公司实验室分离的大鼠精原干细胞采用先机械吹打、后胰蛋白酶消化，结合Percoll密度梯度离心法制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测：

公司实验室分离的大鼠精原干细胞经CD44免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 悬浮

细胞形态 球形

传代特性 可传3代左右

消化液 0.25%胰蛋白酶

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%
核心操作流程

复苏 冻存管37℃水浴迅速解冻，加入培养基离心（1000 RPM，4分钟），弃上清后重悬接种。

培养 贴壁细胞需用PBS润洗，0.25%胰酶消化1-2分钟，终止后按1:2传代；悬浮细胞直接离心分瓶，推荐使用专用培养基。

冻存 取对数期细胞，用含10%DMSO的冻存液（血清:培养基=1:9）重悬，密度≥1×10⁶/ml，程序降温后转入液氮。

细胞处理指南

接收与初步检查：

75%酒精消毒培养瓶外壁，观察培养基颜色及细胞密度。

显微镜下拍照记录（100X、200X）。

贴壁细胞传代：

吸弃旧培养基，PBS轻柔洗涤。

0.05%胰酶-EDTA消化至细胞变圆，加入终止液终止反应。

离心（1000rpm, 5min）后重悬，接种至新培养瓶（37℃, 5% CO₂）。

悬浮细胞处理：

直接离心收集细胞，更换新鲜培养基后继续培养。

注意事项

质量控制：细胞传代比例建议1:2至1:3，避免过度消化。

污染预防：严格无菌操作，定期检测支原体。

代次限制：原代细胞建议使用前5代，以保持功能稳定性。

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