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细胞简介：

小鼠神经星形胶质细胞分离自脑组织；大脑分左右两个半球，大脑皮质（灰质）覆盖着每个大脑半球的大部分，它是神经元胞体集中的地方。内部则是由神经纤维或髓鞘构成的白质。每一个半球都有三个面，即外侧面（约占整个皮质面积的1/3）、内侧面和底面（占2/3的面积）；半球表面有很多深浅不等的沟或裂，沟或裂之间的隆起叫回，它们大大增加了大脑的表面积；大脑外侧面重要的沟、裂有大脑外侧裂、顶枕裂和中央沟。由于三沟裂之界隔，使大脑皮质组分为额叶、顶叶、颞叶、枕叶四大部分。神经星形胶质细胞，是哺乳动物脑内分布最广泛的一类细胞，也是胶质细胞中体积***一种。用经典的金属浸镀技术（银染色）显示此类胶质细胞呈星形，从胞体发出许多长而分支的突起，伸展充填在神经细胞的胞体及其突起之间，起支持和分隔神经细胞的作用。细胞突起的末端常膨大形成脚板或称终足，有些脚板贴附在邻近的毛细血管壁上，因此这些脚板又被称为血管足或血管周足，靠近脑脊髓表面的脚板则附着在软膜内表面，彼此连接构成胶质界膜。细胞刚分离时呈圆形，24h后大部分细胞贴壁，均匀分布于瓶底，部分细胞伸出细小突起，培养4-5d后细胞数量明显增多，呈扁平、多角形，胞质丰富且核浆较少，细胞核呈椭圆形，偏于胞体一侧。神经星形胶质细胞是中枢神经系统的重要细胞组成，不仅具有支持功能，还能够合成及分泌多种神经活性物质，在维持神经元内外环境、生存、迁移、免疫调节、信号转导、轴突生长及功能整合等方面具有重要作用。

方法简介：

公司实验室分离的小鼠神经星形胶质细胞采用酶消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测：

公司实验室分离的小鼠神经星形胶质细胞经GFAP免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 梭形、多角形

传代特性 可传3代左右

消化液 0.25%胰蛋白酶

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%
材料与试剂准备

实验器材：无菌培养皿、移液管、离心管、CO₂培养箱、超净工作台、倒置显微镜、离心机等，所有器材需提前灭菌处理。

基础试剂：

细胞培养基：根据细胞类型选择专用培养基，如DMEM、RPMI-1640、MEM等，部分细胞需添加血清（胎牛血清FBS、新生牛血清NBS）或无血清替代物。

消化液：常用0.25%胰蛋白酶-EDTA溶液，用于组织解离；对于某些敏感细胞，可选用胶原酶、透明质酸酶等。

缓冲液：PBS（磷酸盐缓冲液）、Hanks平衡盐溶液（HBSS），用于冲洗组织和细胞。

其他：抗生素（青霉素、链霉素）、抗真菌剂（两性霉素B）、细胞冻存液（含10% DMSO和90%血清）。

原代细胞分离与培养流程

1. 组织样本处理

取材：从新鲜动物或人体组织中获取样本，操作需在无菌环境下进行，尽量缩短样本暴露时间。

清洗：用含抗生素的PBS反复冲洗组织，去除血液、脂肪等杂质。

剪碎：将组织剪成1-2mm³的小块，便于后续消化。

2. 细胞解离

酶消化法：将组织块加入消化液，37℃水浴孵育，期间轻轻摇晃，根据组织类型调整消化时间（通常15-60分钟）。

机械法：对一些难以酶解的组织，可采用研磨、过筛等方式分离细胞，但需注意避免过度机械损伤。

终止消化：加入含血清的培养基，中和消化酶活性，随后用滤网过滤细胞悬液，去除未消化的组织碎片。

3. 细胞接种与培养

离心收集：将过滤后的细胞悬液离心（1000-1500rpm，5-10分钟），弃上清，用培养基重悬细胞。

细胞计数：使用血细胞计数板或细胞计数仪测定细胞浓度，调整至合适的接种密度（通常1×10⁵-1×10⁶ cells/mL）。

培养条件：将细胞接种于培养瓶/皿中，置于37℃、5% CO₂、湿度95%的培养箱中培养，根据细胞类型定期更换培养基。

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