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细胞详述

肝卵原细胞是肝脏中一种具有强大增值能力和分化潜能的干细胞，在肝脏发生损伤和缺失后，肝脏之所以有强大的再生和修复能力是肝脏中干细胞发挥作用。在肝脏受到严重急性损伤时，肝卵圆细胞被活化，可以分化为肝实质细胞和肝内胆管上皮等多种功能性细胞，修复肝脏的损伤。肝卵圆有肝内和肝外两个来源。

此外肝卵圆细胞与原发性肝癌的发生也有着密切的关系，对肝卵圆细胞的研究在多个方面都有着重要的意义。

细胞特性

1)组织来源于处理后大鼠的肝组织。

2)细胞鉴定：c-kit或AFP免疫荧光染色为阳性。

3)经鉴定细胞纯度高于90%。

4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。

5)细胞生长方式：多角形细胞，贴壁培养。

推荐培养基：

我们推荐使用 DELF 原代 肝卵圆 细胞培养体系 作为体外培养的培养基。
培养基与培养条件

专用培养基：含FBS、生长添加剂、青霉素、链霉素等（推荐使用配套专用培养基）

培养环境：气相为95%空气+5%CO₂，温度37℃

换液频率：每2-3天换液一次

细胞复苏步骤

将冻存管置于37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混匀

1000rpm离心3-4分钟，弃上清，加1-2mL培养基重悬细胞

将细胞悬液接种至培养瓶/皿中，加入适量培养基，培养过夜

次日换液并检查细胞密度

细胞传代（仅当细胞密度达80%-90%时进行）

弃上清，用无钙镁离子PBS润洗细胞1-2次

加入1mL 0.25%胰蛋白酶-EDTA消化液，37℃培养箱消化1-2分钟

显微镜下观察细胞变圆脱落后，加少量培养基终止消化

1000rpm离心4分钟，弃上清，加1-2mL培养基重悬

按1:2比例接种至新培养容器中，加入新鲜培养基培养

细胞冻存

收集细胞，1000rpm离心4分钟，弃上清，PBS清洗一遍

加入无血清细胞冻存液，调整细胞密度至5×10⁶~1×10⁷/mL

每支冻存管分装1mL细胞悬液，做好标识

先置于-80℃冰箱24小时，再转入液氮罐长期储存

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