细胞简介

人肾小管上皮细胞分离自肾组织；肾脏是机体的重要器官，它的基本功能是生成尿液，借以清除体内代谢产物及某些废物、毒物，同时经重吸收功能保留水份及其他有用物质，如葡萄糖、蛋白质、氨基酸、钠离子、钾离子、碳酸氢钠等，以调节水、电解质平衡及维护酸碱平衡。肾脏同时还有内分泌功能，生成肾素、促红细胞生成素、活性维生素D3、前列腺素、激肽等，又为机体部分内分泌激素的降解场所和肾外激素的靶器官。肾脏的这些功能，保证了机体内环境的稳定，使新陈代谢得以正常进行。肾小管是机体肾脏器官上与肾小囊壁层相连的一条细长上皮性小管，具有重吸收(reabsorption)和排泌作用。肾小管按不同的形态结构、分布位置和功能分成近端小管、髓袢和远端小管三部分；近端小管可分为直部和曲部，曲部也称为近曲小管，位于皮质迷路内，于肾小体附近高度蟠曲；远端小管曲部也称为远曲小管，位于皮质迷路内。肾小管上皮细胞是肾小管外面的一层细胞，肾小管上皮细胞的分离、培养是研究肾脏疾病的一项重要技术，目前该细胞分离方法有酶分离法、化学分离法筛网分离法、显微解剖分离法、流式细胞仪分离法等。肾小管上皮细胞主要功能：①肾小管上皮细胞重吸收原尿中几乎全部的葡萄糖和氨基酸；②排泌非营养物质进入终尿；③细胞能分泌炎症介质如细胞因子和趋化因子，通过产生IL-8或直接趋化白细胞参与急性炎症反应；④移植肾炎症和新月体肾炎中PTEpiC表达IL-2R和MHC-Ⅱ类抗原，这说明肾小管上皮细胞参与肾免疫损伤的发生。随着对肾间质纤维化机制研究的日渐加深，肾小管上皮细胞(RTECs)在其中的作用日益被人们重视。因此，提供良好的肾小管上皮细胞模型，在肾小管间质疾病的发病机制和治疗药物筛选的研究中是非常重要的。

方法简介：实验室分离的人肾小管上皮细胞 采用胶原酶消化结合差速贴壁法制备而来制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。

质量检测：实验室分离的人肾小管上皮细胞 经PCK免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：包被条件鼠尾胶原Ⅰ(2-5μg/cm2)

培养基含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率:每2-3天换液一次

生长特性：贴壁

细胞形态：上皮细胞样

传代特性：可传1-2代左右

消化液：0.25%胰蛋白酶人肾小管上皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的**培养状态。

培养技术规范

基础培养基选择需根据细胞类型选用专用配方，如肝细胞培养基含10%胎牛血清和生长因子。培养条件统一设置为37℃、5% CO₂环境，湿度维持在70%-80%。传代操作需在80-90%融合度时进行，使用0.25%胰蛋白酶-EDTA消化1-3分钟，以1:2至1:5比例分瓶。冻存标准采用90%血清+10%DMSO冻存液，程序降温后液氮保存。

质量控制体系

所有原代细胞需通过三项核心检测：

病原体检测：排除HIV-1、HBV、HCV及支原体污染

纯度验证：通过细胞特异性标志物免疫染色（如肝细胞检测白蛋白表达）

活性评估：复苏后活细胞率≥80%，贴壁率≥70% 每批次细胞需提供包含上述数据的质量分析报告。

原代细胞培养注意事项

无菌操作：全程在超净工作台内进行，实验人员需穿戴无菌手套、口罩、实验服，避免细菌、真菌污染。

培养基选择：不同类型的原代细胞对培养基成分要求差异较大，需严格按照细胞说明书选择专用培养基，避免随意更换。

消化时间控制：酶消化时间过长会导致细胞损伤甚至死亡，过短则细胞分离不充分，需通过显微镜观察细胞形态变化，及时终止消化。

传代时机：当细胞融合度达到80%-90%时进行传代，避免细胞过度融合导致接触抑制，影响细胞活性。

冻存与复苏：原代细胞冻存时需缓慢降温（如采用程序降温盒），复苏时快速解冻（37℃水浴1-2分钟），并及时离心去除冻存液中的DMSO，减少细胞毒性。

运输与接收处理

提供两种运输方案：

冻存运输：干冰保温（-80℃可保存1个月），接收后需立即复苏或转入液氮

活细胞运输：T25培养瓶常温运输，接收后静置2-4小时观察贴壁情况 异常需在收到后72小时内反馈，并提供细胞状态照片（100X和200X各一张）。
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